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小鼠CD4、CD8膜外区编码cDNA的克隆与表达

Cloning and expression of the cDNAs encoding the ectodomain of mouse CD4 and CD8

摘要:

目的克隆并表达小鼠CD4和CD8基因,以期制备其抗体为疫苗研究服务.方法从小鼠脾细胞中提取总RNA,利用RT-PCR技术克隆CD4、CD8α和CD8β膜外区片段的编码cDNA,利用谷光苷肽硫基转移酶(GST)融合表达载体pGEX-CS对其进行表达,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blot对重组蛋白进行鉴定.结果以小鼠脾细胞总RNA为模板,分别扩增出小鼠CD4、CD8α和CD8β膜外区片段的编码cDNA,将其插入表达载体pGEX-CS,得到重组质粒pGEX-CSCD4、pGEX-CSCD8α和pGEX-CSCD8β.将所获表达载体转化E.coli BL21,用IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测表明小鼠CD4、CD8α、CD8β片段均得到成功表达,其表达量可占菌体蛋白总量的30%左右,且均可与抗GST抗体反应.结论成功克隆、表达了小鼠CD4、CD8α和CD8β,为进一步制备抗体从而用于免疫学研究打下了基础.

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