换一批小鼠CD4、CD8膜外区编码cDNA的克隆与表达
Cloning and expression of the cDNAs encoding the ectodomain of mouse CD4 and CD8
摘要：
目的克隆并表达小鼠CD4和CD8基因,以期制备其抗体为疫苗研究服务.方法从小鼠脾细胞中提取总RNA,利用RT-PCR技术克隆CD4、CD8α和CD8β膜外区片段的编码cDNA,利用谷光苷肽硫基转移酶(GST)融合表达载体pGEX-CS对其进行表达,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blot对重组蛋白进行鉴定.结果以小鼠脾细胞总RNA为模板,分别扩增出小鼠CD4、CD8α和CD8β膜外区片段的编码cDNA,将其插入表达载体pGEX-CS,得到重组质粒pGEX-CSCD4、pGEX-CSCD8α和pGEX-CSCD8β.将所获表达载体转化E.coli BL21,用IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测表明小鼠CD4、CD8α、CD8β片段均得到成功表达,其表达量可占菌体蛋白总量的30%左右,且均可与抗GST抗体反应.结论成功克隆、表达了小鼠CD4、CD8α和CD8β,为进一步制备抗体从而用于免疫学研究打下了基础.
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作者单位：
安徽医科大学组胚教研室,合肥,230032;山东省病毒学研究所/山东省医学病毒学重点实验室暨卫生部生物技术药物重点实验室,济南,250062
[1]
中国疾病预防控制中心病毒预防控制所,北京,100052;山东大学医学院,济南,250062
[2]
山东省病毒学研究所/山东省医学病毒学重点实验室暨卫生部生物技术药物重点实验室,济南,250062;中国疾病预防控制中心病毒预防控制所,北京,100052
[3]
安徽医科大学组胚教研室,合肥,230032
[4]
山东省病毒学研究所/山东省医学病毒学重点实验室暨卫生部生物技术药物重点实验室,济南,250062
[5]
期刊：
《安徽医科大学学报》2005年40卷1期 1-4页
ISTICPKUCA
主题词：
小鼠(Mice)抗原(Antigens)膜(Membranes)逆转录聚合酶链反应(Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction)抗体(Antibodies)
栏目名称：
基础医学研究
DOI：
10.3969/j.issn.1000-1492.2005.01.001
发布时间：
2005-03-17
基金项目：
国家高技术研究发展计划(863计划)
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