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牛乳铁蛋白肽基因LfcinB的慢病毒载体的构建及鉴定

摘要:

目的 构建并鉴定牛乳铁蛋白肽基因LfcinB基因的慢病毒载体,为LfcinB应用于基因治疗奠定了基础,以便进一步研究LfcinB的功能.方法 根据GenBank报道的LfcinB基因序列,合成LfcinB基因,PCR方法扩增LfcinB基因,与经EcoR 1和Nhe 1酶切后的pljm1载体[含CMV启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]连接、转化,产生pljm1-LfcinB慢病毒表达载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定.用pljm1-LfcinB载体、△8.91载体、pvsvg载体三质粒共转染包装细胞293T细胞,包装产生重组慢病毒,以293T细胞中绿色荧光蛋白GFP的表达水平测定病毒滴度.Western blot检测LfcinB的表达.结果 PCR和测序证实成功构建了pljm1-LfcinB慢病毒载体.浓缩病毒悬液滴度为2×108 TU/ML.Western blot检测到目的肽成功表达.结论 成功构建含LfcinB的慢病毒载体,为进一步感染细胞和基因治疗奠定了基础.

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作者: 张晓宇 [1] 秦宜德 [1] 张文晓 [1] 郑欣 [1] 何晓光 [1] 王巍 [1]
期刊: 《安徽医科大学学报》2011年46卷7期 709-712页 ISTICPKU
分类号: R341R394.2
栏目名称: 技术与方法
DOI: 10.3969/j.issn.1000-1492.2011.07.028
发布时间: 2011-09-01
基金项目:
国家自然科学基金
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