人EBI3蛋白及其突变体的表达及定位研究

Expression and localization of human protein EBI3 and its mutants

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摘要目的：研究人EB病毒诱导的基因3(EBI3)及其突变体在哺乳动物细胞中的表达及定位差异及其原因。方法基于NCBI 数据库中人EBI3氨基酸的序列分析,利用分子克隆技术构建人EBI3真核表达质粒pcDNA3．1-EBI3-FLAG、单独包含氨基端或羧基端Ⅲ型纤连蛋白(FN3)结构域的缺失突变体的表达质粒pcDNA3．1-EBI3(1~135)-FLAG 和 pcDNA3．1-EBI3(125~230)-FLAG 以及第210位天冬氨酸(Asp)点突变体Asp210的表达质粒pcDNA3．1-EBI3-D210AFLAG； Western blot 方法检测EBI3及其突变体在HEK 293T 细胞中的表达；免疫荧光实验观察人EBI3及各突变体在 COS7细胞中的定位。结果成功构建了下游携带FLAG 标签的人EBI3及其突变体的真核表达质粒；Western blot 结果显示重组蛋白均能在HEK 293T 细胞中稳定表达；经激光共聚焦显微镜观察,EBI3及其缺失突变体在COS7细胞的表达位置发生明显变化。结论人EBI3及其突变体真核表达质粒均能在HEK 293T、COS7细胞中成功表达；人EBI3缺失突变体在COS7细胞中的定位发生明显变化,氨基端结构域可能在EBI3蛋白的正确定位中发挥重要作用；EBI3蛋白的第210位Asp 的突变影响了其在细胞内的定位。