淫羊藿苷对MC3T3-E1细胞增殖分化的影响及机制研究
Effects of icariin on proliferation and differentiation of MC3T3-E1 cells and its mechanism
目的 研究淫羊藿苷(ICA)对小鼠颅顶前成骨细胞(MC3T3-E1)增殖、分化的影响,以及骨形态发生蛋白2(BMP-2)/Smads信号通路在成骨细胞增殖、分化中的作用.方法 用含不同浓度ICA(0、10、20、40 ng/ml)的完全培养液分别培养MC3T3-E1细胞48、72、96 h.HE染色法观察ICA对MC3T3-E1细胞形态的影响;分别用CCK-8及碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒检测ICA对MC3T3-E1细胞增殖活性和细胞ALP活性的影响;Western blot检测ICA对MC3T3-E1细胞BMP-2、骨形态发生蛋白2受体(BMPR-2)、Smad4和Smad1/5/8蛋白表达水平的影响.向细胞培养液中加入BMP抑制剂头蛋白(Noggin,100 ng/ml)阻断BMP-2/Smads信号通路后,再次检测上述各实验指标的变化.结果 ICA对MC3T3-E1细胞形态无明显影响;ICA(10、20 ng/ml)可增强MC3T3-E1细胞增殖活性(P均<0.01).ICA(10、20ng/ml)可增强MC3T3-E1细胞ALP活性(P均<0.01).阻断BMP-2/Smads信号通路后,ICA促细胞增殖作用(P<0.01)及促分化作用(P<0.01)明显下降.ICA(10、20 ng/ml)可提高MC3T3-E1细胞BMP-2、BMPR-2、Smad4和Smad1/5/8蛋白表达水平(P均<0.01).当阻断BMP-2/Smads信号通路后,ICA促BMP-2、BMPR-2、Smad4和Smad1/5/8蛋白表达作用均受到抑制.结论 ICA对MC3T3-E1细胞形态无明显影响,ICA可能是通过上调MC3T3-EI前体成骨细胞BMP-2蛋白的表达,激活BMP-2/Smads信号通路,启动下游成骨相关基因的表达,从而促进细胞的增殖、分化.
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