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LncCCAT1竞争性结合miR-583p通过调节MAPK13的表达调控乳腺癌细胞干细胞样特性

LncCCAT1 competitively binds miR-583 p to regulate the dryness of breast cancer cells by regulating the expression of MAPK13

摘要:

目的 探究LncCCAT1竞争性结合miR-583p,通过调节MAPK13的表达对MCF-7细胞干细胞样特性的影响.方法 从MCF-7细胞中分离乳腺癌肿瘤干细胞,q-PCR检测贴壁细胞、悬浮球细胞和再贴壁细胞中CCAT1和miR-583p表达;单独或联合转染shRNA-CCAT1-2和miR-583p inhibitor至MCF-7细胞,测miR-583p表达;荧光素酶报告实验验证miR-583p与CCAT1靶向关系;将细胞分为4组:对照组、shRNA-CCAT1-2组、miR-583p inhibitor组、shRNA-CCAT1-2+miR-583p inhibitor组.ALDEFLUOR分析法检测乙醛脱氢酶(ALDH)活性;Western blot检测Y框蛋白2(SOX2)、NANOG、乙醛脱氢酶1(ALDH1)蛋白表达水平;成球实验检测细胞成球直径;构建慢病毒LV-MAPK13并感染MCF-7细胞过表达MAPK13,q-PCR检测MAPK13水平,将细胞分为4组:对照、shRNA-CCAT1-2、LV-MAPK13和shRNA-CCAT1-2+LV-MAPK13组,Western blot检测丝裂原活化蛋白激酶13(MAPK13)、SOX2、NANOG、ALDH1蛋白表达水平.结果 与贴壁细胞相比较,悬浮球细胞CCAT1表达水平升高(P<0.05),miR-583p表达水平降低(P<0.05);miR-583p和CCAT1存在直接靶向作用关系;与对照组相比较,shRNA-CCAT1-2组ALDH活性降低,SOX2、NANOG、ALDH1蛋白水平降低(P<0.05),成球直径降低(P<0.05).miR-583p in-hibitor组ALDH活性升高,SOX2、NANOG、ALDH1蛋白水平升高(P<0.05),成球直径升高(P<0.05).与miR-583p in-hibitor组相比较,shRNA-CCAT1-2+miR-583p inhibitor组ALDH活性降低,SOX2、NANOG、ALDH1蛋白水平降低(P<0.05),成球直径降低(P<0.05);miR-583p与MAPK13存在直接靶向作用关系.与贴壁细胞相比较,悬浮球细胞MAPK13水平升高(P<0.01).与对照组相比较,LV-MAPK13组MAPK13水平升高(P<0.001);与对照组相比较,shRNA-CCAT1-2组MAPK13、SOX2、NANOG、ALDH1蛋白水平降低(P<0.05),LV-MAPK13组MAPK13、SOX2、NANOG、ALDH1蛋白水平升高(P<0.05).与LV-MAPK13组相比较,shRNA-CCAT1-2+LV-MAPK13组MAPK13、SOX2、NANOG、ALDH1蛋白水平降低(P<0.05).结论 LncCCAT1竞争性结合miR-583p通过调节MAPK13的表达抑制MCF-7细胞干细胞样特性.

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作者: 庄欢 [1] 朱晓磊 [1] 吴晓琴 [1] 张庆 [1] 方靖 [1] 吴池华 [1]
期刊: 《安徽医科大学学报》2021年56卷5期 762-768页 ISTICPKU
分类号: R737.9
栏目名称: 基础医学研究
DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2021.05.017
发布时间: 2021-06-11
基金项目:
四川省科技计划项目
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