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苹果酸酶2乙酰化调控脑胶质瘤细胞增殖的机制

Mechanism of malic enzyme 2 acetylation regulating the proliferation of glioma cells

摘要:

目的 研究苹果酸酶2(ME2)的乙酰化修饰在恶性脑胶质瘤细胞系U87MG增殖中的功能及其分子机制.方法 基于序列保守性并结合质谱数据库,预测ME2的乙酰化修饰位点,再构建点突变体,转染细胞,通过免疫沉淀(IP)和Western blot确定修饰位点;通过293T细胞纯化ME2野生型和突变体,检测乙酰化修饰对ME2酶活的影响;通过共转染、富集纯化并结合酶活实验,检测去乙酰化酶Sirtuin3(SIRT3)对ME2酶活、细胞内活性氧(ROS)及NADH水平的影响;在U87MG细胞中用shRNA敲低内源ME2后,回转野生型和模拟乙酰化突变型,检测ME2的乙酰化对细胞增殖的影响,并通过裸鼠成瘤在动物水平验证;通过Western blot在恶性脑胶质瘤临床样本中检测癌与癌旁组织中ME2的乙酰化水平差异.结果 K156是ME2主要的乙酰化修饰位点,该位点的乙酰化会抑制ME2活性并抑制U87MG细胞增殖.SIRT3去乙酰化ME2,提高ME2活性,促进NADH的生成,降低细胞内ROS水平.结论 SIRT3调控的ME2乙酰化修饰通过提高自身酶的活性,上调细胞NADH水平,降低ROS水平,从而促进U87MG细胞增殖.

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作者: 张成 [1] 牛朝诗 [2] 梅加明 [2] 司文霞 [3] 魏祥品 [2]
作者单位: 安徽医科大学附属省立医院神经外科,合肥 230001;阜阳市第五人民医院神经外科,阜阳 236001 [1] 安徽医科大学附属省立医院神经外科,合肥 230001 [2] 湖北理工学院医学院湖北省肾脏疾病发生与干预重点实验室,黄石 435000 [3]
期刊: 《安徽医科大学学报》2021年56卷6期 920-924页 ISTICPKUCA
分类号: R739.4
栏目名称: 基础医学研究
DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2021.06.016
发布时间: 2021-08-09
基金项目:
国家自然科学基金青年项目 安徽省自然科学基金
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