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TLR4/HIF-1α信号通路介导糖化低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞损伤

The TLR4/ HIF-1α signaling pathway mediates glycated low density lipoprotein induced injury of human umbilical vein endothelial cells

摘要:

目的 研究糖化低密度脂蛋白(Gly-LDL)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的炎症损伤及Toll样受体4(TLR4)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响,并探讨其可能的机制.方法 体外培养HUVECs,实验分为对照组、阳性对照组[50 mg/L普通低密度脂蛋白(n-LDL)]、Gly-LDL(50、75、100 mg/L)组.CCK-8法测定细胞增殖情况;划痕实验测定细胞迁移能力;ELISA法测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)分泌水平;qRT-PCR测定TLR4、HIF-1α、TNF-α、IL-6 mRNA水平;Western blot测定TLR4、HIF-1α、TNF-α、IL-6蛋白水平;分别用TLR4、HIF-1α 的si-RNA干预Gly-LDL对HUVECs的作用,实验分为对照组、模型组(Gly-LDL 100 mg/L)、si-TLR4组(Gly-LDL 100 mg/L+si-TLR4)、TLR4空载组(Gly-LDL 100 mg/L+si-NC1)、si-HIF-1α组(Gly-LDL 100 mg/L+si-HIF-1α)和HIF-1α 空载组(Gly-LDL 100 mg/L+si-NC2).Western blot法检测TLR4、HIF-1α蛋白表达水平,验证TLR4、HIF-1α 相互作用关系.结果 Gly-LDL(50、75、100 mg/L)组均可抑制HUVECs的增殖及迁移能力(P<0.01),刺激HUVECs中炎症细胞因子TNF-α、IL-6、ICAM-1、VCAM-1分泌量增加(P<0.001),上调TLR4、HIF-1α、TNF-α、IL-6 mRNA和蛋白水平(P<0.05),并呈浓度依赖性.敲除TLR4后,与模型组相比,TLR4、HIF-1α蛋白表达均下调(P<0.001).敲除HIF-1α后,与模型组相比,仅HIF-1α蛋白表达下调(P<0.001),而TLR4蛋白在Gly-LDL作用下表达上调.结论 Gly-LDL可能通过上调TLR4/HIF-1α炎症信号通路抑制HUVECs的增殖与迁移,上调炎症细胞因子表达,导致血管内皮损伤.

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作者: 邱军辉 [1] 刘美志 [2] 孙杜桑 [2] 潘婷 [3] 赵维维 [2] 沙雯君 [2] 鲁郡 [2] 雷涛 [4]
作者单位: 安徽医科大学上海普陀中心临床学院,上海 200062 [1] 上海中医药大学附属普陀医院内分泌科,上海 200062 [2] 成都中医药大学医学与生命科学学院,成都 610000 [3] 安徽医科大学上海普陀中心临床学院,上海 200062;上海中医药大学附属普陀医院内分泌科,上海 200062 [4]
期刊: 《安徽医科大学学报》2022年57卷10期 1614-1620页 ISTICPKU
分类号: R589.2
栏目名称: 基础医学研究
DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2022.10.019
发布时间: 2022-11-08
基金项目:
国家自然科学基金 上海市医学重点专科建设项目 上海市普陀区卫生健康系统临床特色专科建设项目
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