人骨形成蛋白-2基因的克隆及其重组腺病毒载体的构建
Cloning of human bone morphogenetic protein-2 gene and construction of recombinant adenoviral vector
目的:克隆人骨形成蛋白-2(BMP-2)基因cDNA,构建含BMP-2基因的重组腺病毒载体.方法:采用RT-PCR方法克隆BMP-2基因cDNA,并插入克隆载体pGEM-T中进行全序列分析.将BMP-2基因cDNA克隆到穿梭载体pShuttle-CMV中,构建pShuttle-BMP2重组质粒,再将其中的表达盒克隆入Adeno-X腺病毒DNA中,获得重组腺病毒DNA-pAd-BMP.结果:成功地克隆长约1 200 bp的BMP-2 cDNA,并成功地构建其腺病毒载体,经线性化的pAd-BMP2 DNA转染HEK293细胞,包装、扩增后得到人骨形成蛋白-2重组腺病毒,其滴度约为1×1011 nfu·L-1,该滴度可满足进一步的BMP-2成骨作用的研究.结论:成功地构建BMP-2腺病毒载体.
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