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ODDD调控EGFP基因的乏氧特异表达载体的构建及其意义

Construction of specific expression vector of EGFP regulated by ODDD in cells under hypoxia and its significance

摘要:

目的:构建乏氧诱导因子的氧依赖降解结构域(ODDD)调控的乏氧特异性表达荧光报告载体,探索其乏氧调控目的基因表达的可行性.方法:基因重组技术构建含有序列ODDD403-601aa、ODDD549-575aa和其2串联体调控增强型绿色荧光蛋白(EGFP)荧光报告载体.φA细胞中瞬时表达EGFP,应用RT-PCR技术、Westernblotting技术和流式细胞术检测ODDD调控EGFP乏氧特异性表达.结果:克隆得到了ODDD/EGFP表达载体,进行细胞转染实验,在细胞中成功表达EGFP.Western blotting检测,ODDD可以调控EGFP乏氧特异性表达.流式细胞术检测,正常氧浓度下细胞转染pEGFP-ODDD401-603、pEGFP-ODDD549-575和pEGFP-ODDD2(549-575) EGFP的荧光强度分别为(6.06±1.97)%、(11.99±1.13)%和(23.16±2.79)%,低于缺氧条件下EGFP的表达量(P<0.05).结论:ODDD对靶基因对氧的反应性调节受细胞内的蛋白酶影响;ODDD的调控作用发生在翻译后的蛋白水平,且与细胞内蛋白酶系统功能密切相关.

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作者: 蒋永兴 [1] 方艳秋 [2] 刘磊 [2] 谭岩 [3]
期刊: 《吉林大学学报(医学版)》2012年38卷5期 870-875,封2页 ISTICPKUCSCD
分类号: R733
栏目名称: 基础研究
发布时间: 2015-09-18
基金项目:
吉林省科技厅国际合作项目资助课题 吉林省卫生厅项目资助课题
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