Raw264.7细胞向破骨细胞分化诱导培养体系的改良
Improved induction culture system for Raw264.7 cells to differentiate into osteoclasts
目的:通过改良细胞培养方案建立体外诱导 Raw264.7细胞分化形成成熟破骨细胞(OC)的高效培养体系。方法:向 Raw264.7细胞培养液α-MEM 中添加50μg · L-1 M-CSF、100μg · L-1 RANKL 和1×10-8 mol·L-11α,25-(OH)2 D3,于5% CO2、37℃孵箱中培养12 d,每3 d换液1次,每次换液前对细胞进行短暂消化。倒置显微镜下观察细胞形态变化,并利用 HE染色、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、FITC-phalloidin染色和免疫荧光染色鉴定 OC是否成熟并具有吞噬功能。结果:通过改良培养方法,在诱导过程中培养孔内的大部分区域始终保持单层细胞的生长状态。镜下观察和 HE染色,诱导第12天时 OC胞体覆盖培养面积的70%;FITC-phalloidin染色,伴随着 OC成熟,伪足内出现的束状伪足小体逐渐变为环形,最终融合带状肌动蛋白环环绕在胞质周围;免疫荧光染色,诱导12 d后 OC表达的降钙素受体(CTR)较前体细胞显著增加, TRAP染色显示 OC胞浆内呈现大量红色颗粒。提示获得的 OC成熟并具有吞噬功能。结论:本实验通过改良培养方法,联合应用细胞因子50μg·L-1 M-CSF、100μg·L-1 RANKL和1×10-8 mol·L-11α,25-(OH)2 D3建立了体外诱导 Raw264.7细胞分化形成成熟 OC的高效培养体系。
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