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人LncRNA MIR31HG基因稳定转染PC9细胞系的构建及其对细胞增殖和迁移的影响

Construction of PC9 cell lines stably transfected with human LncRNA MIR31HG gene and its effects on cell proliferation and migration

摘要:

目的:检测过表达人MIR31HG基因对PC9细胞增殖和迁移的影响,阐明促癌基因MIR31HG的作用机制.方法:通过RT-PCR法扩增长链非编码RNA(LncRNA)MIR31HG全长序列,分子克隆至pcDNA3.1(―)真核表达载体,将pcDNA3.1-MIR31HG过表达质粒和对照质粒pcDNA3.1分别转染人肺癌PC9细胞.采用酶切鉴定法检测MIR31HG过表达载体的构建情况.通过G418药物筛选建立稳定过表达MIR31HG的PC9细胞系(PC9-pcDNA3.1-MIR31HG,稳定转染组)和对照细胞系(PC9-pcDNA3.1,空载体组).采用RT-PCR法检测稳定转染细胞系中MIR31HG基因表达水平,采用CCK-8法和划痕愈合实验检测PC9细胞增殖活性和迁移能力.结果:琼脂糖凝胶电泳,成功扩增得到了MIR31HG的特异基因片段;MIR31HG真核表达载体经双酶切后分别产生目的基因和载体2个片段.RT-PCR法检测,稳定转染组细胞中MIR31HG mRNA表达水平明显高于空载体组(P<0.05).CCK-8检测,在培养24、36和48 h时,稳定转染组细胞增殖活性明显高于空载体组(P<0.01).划痕愈合实验,在培养48 h时,稳定转染组细胞划痕愈合率明显高于空载体组(P<0.05).结论:成功构建了人LncRNA MIR31HG基因的真核过表达载体和过表达MIR31HG的稳定转染PC9细胞系,且MIR31HG过表达能够促进肺癌PC9细胞增殖和迁移.

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作者: 代娟娟 [1] 杨丽娟 [1] 杜静 [1] 苗双 [1] 席思川 [1] 李晨 [2] 武艳 [1]
期刊: 《吉林大学学报(医学版)》2019年45卷4期 801-806页 ISTICPKUCSCDCAEMBase
分类号: Q78
栏目名称: 基础研究
DOI: 10.13481/j.1671-587x.20190410
发布时间: 2019-08-16
基金项目:
山东省科技厅科学基金资助课题 滨州医学院科研计划与科研启动基金资助课题 山东省滨州市科技局科技发展计划资助课题
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