两种不同肝纤维化相关细胞因子shRNA重组质粒的构建
Construction of two different of hepatic fibrosis-related cytokines shRNA recombinant plasmid
目的 构建以大鼠结缔组织生长因子(CTGF)和金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)基因为靶点的短发夹RNA(shRNA)表达质粒.方法 根据前期筛选出的对CTGF和TIMP-1基因最有效的RNA干扰靶位,各设计一对有短发夹结构的RNA干扰(RNAi)靶点序列,退火形成双链DNA,克隆到质粒载体psiRNA-h7SKGFPzeo;构建重组质粒载体psiRNA-GFP-CTGF和psiRNA-GFP-TIMP-1,并进行酶切与测序鉴定.结果 酶切与序列测定均提示重组质粒psiRNA-GFP-CTGF和psiRNA-GFP- TIMP-1构建成功.结论 成功构建靶向大鼠CTGF和TIMP-1最有效的RNAi靶位的shRNA表达质粒,为进一步探索肝纤维化基因治疗的新途径打下了实验基础.
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