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基因打靶置换型载体的构建和应用研究

Construction and application of gene targeting replacement vector

摘要:

目的:构建针对小鼠凝血因子Ⅸ(mFⅨ)基因的基因打靶置换型载体,并用于小鼠胚胎干细胞基因打靶研究.方法:在用噬斑原位杂交法克隆mFⅨ基因组DNA并完成结构分析的基础上,利用常规的分子克隆技术,设计并构建置换型载体,经过限制性内切酶酶切鉴定和PCR鉴定其结构正确后,用电穿孔法对体外培养的小鼠胚胎干细胞Rl株进行基因转移,经G418/GANC(Gancyclovlr)分组药物选择,进行pMFⅣDEL载体的应用研究.结果:构建获得包括正负双向选择基因的表达元件、长短同源臂等在内的基因打靶置换型载体pMFⅨDEL,在胚胎干细胞中能有效地发生重组,正负双向选择系统的应用对同源重组事件富集效率提高了24倍.结论:本研究构建获得了针对mFⅨ基因的置换型载体,在胚胎干细胞基因打靶中得到有效的应用.

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作者: 戴旭明 [1] 薛红 [2] 杨桦 [1] 胡以平 [1] 傅继梁 [1]
期刊: 《第二军医大学学报》1998年19卷1期 5-8页 ISTICPKUCSCD
分类号: Q782
栏目名称: 论著
DOI: 10.3321/j.issn:0258-879X.1998.01.002
发布时间: 2004-01-08
基金项目:
国家自然科学基金 上海市生命科研中心项目 军队医药卫生科研项目
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