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Rac1-siRNA表达质粒的构建及Rac1对SW480细胞单克隆形成的影响

Effect of small interfering RNA targeting Racl gene on colony formation of SW480 cells in vitro

摘要:

目的 构建针对Rac1的siRNA表达载体,并观察其对大肠癌SW480细胞中Rac1蛋白表达的抑制作用,同时研究Rac1蛋白表达抑制后细胞在体外软琼脂糖中单克隆形成情况.方法 化学合成用于产生针对Rac1的发卡状RNA的寡核苷酸,各64个碱基,退火后插入线性化的pSUPER载体的H1启动子下游.重组载体经限制性酶切和测序.把构建的载体转染大肠癌细胞系SW480,观察其对Rac1蛋白表达的干扰作用,软琼脂糖体外克隆形成实验研究SW480抑制Rac1蛋白表达后的效果.结果 限制性酶切和序列测定表明成功构建了可以表达针对Rac1的发卡状RNA表达载体,该载体表达的发卡状RNA在SW480细胞中能够有效的下调Racl蛋白的表达.体外软琼脂单克隆形成实验显示,抑制Rac1蛋白表达后,形成的单克隆数目明显减少,直径也明显缩小.结论 成功构建了针对Rac1的发卡状RNA表达载体;体外软琼脂单克隆实验表明Rac1蛋白对SW480细胞克隆形成数目及大小有明显影响,说明Rael蛋白在大肠癌的体外生长过程中具有重要作用.

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