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蛋白激酶D1在烟曲霉介导的NF-κB信号通路激活及转录活性中的作用

Functional role of protein kinase D1 in Aspergillums fumigates-induced activation of nuclear factor-κB signal pathway and transcription

摘要:

目的 研究蛋白激酶D1 (PKDl)在烟曲霉介导的NF-κB信号通路激活及转录活性中的作用,为进一步探讨PKD1在烟曲霉感染引起的肺曲霉病中的作用及其机制奠定基础.方法 首先将GFP、GFP-PKD1表达质粒分别转染人肺腺癌细胞A549和HEK293细胞中,分别将灭活的烟曲霉分生孢子(1×105 CFU/ml)于不同时间处理上述两组细胞,Western blotting证实PKD1的过表达,并检测PKD1的磷酸化活性;其次在A549细胞中分别转染GFP-PKD1、siRNA-PKD1并以灭活的烟曲霉分生孢子处理细胞30 min,分别检测下游NF-κB通路相关信号分子的磷酸化活性;最后,将NF-κB-1uc荧光素酶报告基因及内参照报告质粒海肾荧光素酶(pRL-SV40)共转染人表达GFP、GFP-PKDl的A549细胞中,两组细胞在有无烟曲霉分生孢子的作用下处理24 h,收集细胞裂解液,进行双色荧光素酶活性检测.结果 Western blotting证实PKD1的过表达时间依赖性地增强烟曲霉刺激的A549细胞和HEK293细胞中PKD1的磷酸化活性及NF-κB通路中IKB和p65(pS276)的磷酸化活性,反之,敲低PKD1的表达则抑制烟曲霉介导的NF-κB通路中IKB和p65(pS276)的磷酸化活性.过表达PKD1明显增加NF-κB-luc荧光素酶的转录激活活性.结论 PKD1可能在烟曲霉刺激的NF-κB通路的激活及转录活性中起重要作用.

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作者: 牛晓璐 [1] 许万福 [1] 李松玉 [1] 柯志勇 [1] 曾方银 [2] 罗深秋 [1] 邓凡 [1]
期刊: 《南方医科大学学报》2013年33卷3期 351-355页 MEDLINEISTICPKUCSCDCA
栏目名称: 基础研究
DOI: 10.3969/j.issn.1673-4254.2013.03.09
发布时间: 2013-06-09
基金项目:
国家自然科学基金 广东省自然科学基金 广东省自然科学基金博士启动基金
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