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蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型12负性调控心脏HERG钾通道电流

Protein tyrosine phosphatase non-receptor type 12 negatively regulates cardiac HERG chan-nel currents

摘要:

目的:研究蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型12(PTPN12)对心脏HERG钾通道电流的调控作用。方法(1)质粒构建和基因转染:PCR技术构建各种质粒,应用脂质体将各种质粒转染HEK293细胞,经G418筛选获得稳定表达的细胞株;(2)应用抗PTPN12抗体进行Western blotting分析检测PTPN12的表达;(3)细胞电生理检测:应用膜片钳技术检测单独表达HERG组(HEK293/HERG细胞)、PTPN12过度表达组(将pCDNA3.1-PTPN12-RFP转染HEK293/HERG细胞)、PAO处理组(PTPN12/HERG组基础上加入抑制剂PAO)、herg突变组(将pCDNA3.1-PTPN12-RFP转染HEK293/HERGY327A-Y700A-Y845A细胞株)的HERG钾通道电流。结果(1)成功构建herg突变质粒和pCDNA3.1-PTPN12-RFP质粒,并获得稳定表达的细胞株;(2)共转染pCDNA3.1-PTPN12-RFP质粒的HEK293/HERG细胞在荧光显微镜下可观察到PTPN12-RFP在细胞中的表达,Western blotting可检测到PTPN12的表达;(3)PTPN12过度表达组脉冲电流密度明显低于对照组(P<0.01),PAO处理组和herg突变组电流密度明显高于PTPN12/HERG组(P<0.01)。结论PTPN12对心脏HERG钾通道电流具有明显负性调控作用,其可能机制是PTPN12减弱了HERG钾通道酪氨酸磷酸化程度。这一发现有助于更深刻理解HERG钾通道调控机制和长QT综合征发病机制。

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作者: 林吉进 [1] 刘树楷 [1] 郑方芳 [1] 马青艳 [1] 余宏 [1] 任莉 [1] 沈心远 [1]
期刊: 《南方医科大学学报》2013年12期 1718-1722页 MEDLINEISTICPKUCSCD
栏目名称: 基础研究
DOI: 10.3969/j.issn.1673-4254.2013.12.02
发布时间: 2013-12-25
基金项目:
国家自然科学基金(81070151) 广东省自然科学基金(S2012010009324)Supported by National Natural Science Foundation of China
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