抗人AFP单链抗体的制备、鉴定及其免疫学活性的测定
Construction, identification and determination of immunologic activity of murine anti-AFP ScFv
目的 构建具有免疫学活性的抗人甲胎蛋白单链抗体ScFv (single chain fragment of variety region,ScFv),为进一步的研究奠定实验基础.方法 采用RT-PCR 技术,从分泌抗人AFP 单克隆抗体的杂交瘤细胞中扩增mAb 的VH、VL 基因,并进一步将其组装成VH-Linker-VL 型的ScFv 片段.将ScFv 片段亚克隆至原核分泌型表达载体pUC19,将pUC19-ScFv 纯化质粒转染大肠杆菌BL21 并用IPTG 诱导表达ScFv 蛋白.用SDS-PAGE方法检测ScFv 的表达,采用ELISA 检测ScFv 的亲和活性.结果 大肠杆菌BL21 可被诱导表达ScFv 蛋白.SDS-PAGE 法证实ScFv 蛋白在细胞包涵体有表达,大小约24 kD.ELISA 检测表明,ScFv 蛋白经能与重组人AFP 纯化抗原结合,并具有抑制亲本单抗与其结合的能力.结论 成功构建抗人AFP 的ScFv 表达载体,并能有效表达出具有免疫学活性的ScFv 蛋白.
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