miR-34b对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响及相关机制

Effect of miRNA-34b on osteogenic differentiation of hBMSCs and its protential mechanism

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摘要目的：探讨miRNA-34b在骨髓间充质干细胞成骨分化过程中的表达及其可能的作用靶点和作用机制。方法：采用密度梯度离心和全骨髓贴壁相结合的方法分离培养人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells，hBMSCs)，并在体外诱导成骨分化。采用实时荧光定量PCR技术，检测hBMSCs成骨分化过程中的miR-34b的表达水平；然后过表达miR-34b，进一步观察其对hBMSCs成骨分化的影响。同时检测过表达miR-34b对成骨分化的关键信号通路之一Notch信号通路的活性影响，初步探讨其可能涉及的作用机制。结果：成功分离出hBMSCs，并构建了hBMSCs体外诱导成骨分化模型；且随着成骨诱导培养时间的延长，miRNA-34b表达水平逐渐降低。ALP活性检测、茜素红染色检测结果显示过表达miRNA-34b后，ALP活性显著降低，且茜素红染色的钙盐结节明显减少；同时Western blot实验结果显示过表达miRNA-34b后，成骨特异性标记分子Runx2的蛋白表达水平显著下降(P<0.05)。此外，过表达miRNA-34b后，Notch信号通路的活性显著降低。结论：miRNA-34b能够负向调控人骨髓间充质干细胞成骨分化；其作用机制可能与抑制Notch信号通路的活性有关，提示miRNA-34b可以作为诊断和靶向治疗慢性炎症性骨疾病的潜在作用靶点。