换一批应用PCR-RFLP技术检测乙型肝炎病毒变异rtI233V
Application of PCR-RFLP in the detection of hepatitis B virus rtI23 3V mutants
摘要：
目的 建立一种应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析技术检测乙型肝炎病毒(HBV)变异rtI233V的方法 .方法 参照GenBank收录的HBV基因逆转录(RT)区序列设计PCR引物,根据HBV RT区rt233位野生型和变异犁的序列,分别选择Bst1107I和Bsp1407I两种内切酶.以rtI233V变异株及野毒株质粒为模板进行PCR扩增,PCR产物分别用Bst1107I和Bsp14071两种限制性内切酶进行酶切,观察酶切产物琼脂糖凝胶电泳条带变化.并以变异型和野生型质粒的不同配比,分析该检测方法 的敏感性.结果 本研究建立的PCR-RFLP方法 可同时检测野毒株和rtI233V变异株.PCR扩增后,野毒株和rtI233V变异株的PCR产物长度均为255 bp.以Bst 11071酶切,野毒株质粒的PCR产物可以切成75 bp和180 bp两段,rtI233V变异株PCR产物的长度保持不变.以Bsp1 4071酶切,rtI233V变异株质粒的PCR产物可以切成75bp和180bp两段,野毒株质粒的PCR产物长度保持不变,测序结果 与上述结果 一致.敏感性检测表明,此方法 至少可检出标本中10%的变异株.应用此方法 检测100例慢性乙型肝炎患者,筛选出2例rtI233V变异患者.结论应用PCR-RFLP方法 可检测rtI233V变异,具有较高的敏感性,可用于HBV变异rtI233V的早期诊断.
更多
作者单位：
复旦大学附属华山医院感染病科,上海,200040
[1]
期刊：
《世界临床药物》2009年30卷3期 162-165页
ISTICCA
主题词：
乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus)方法(Methods)聚合(Polymerization)多态性, 限制性片段长度(Polymorphism, Restriction Fragment Length)质粒(Plasmids)
分类号：
R512.6+2
栏目名称：
基础研究
发布时间：
2009-04-24
基金项目：
国家高技术研究发展计划(863计划)
上海市科委基础研究重点课题
国家自然科学基金
- 浏览：178
- 被引：3
- 下载：8
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
