换一批腺病毒介导血管内皮生长因子转染脐带间充质干细胞的实验研究
Transfection of Adenovirus-mediated Vascular Endothelial Growth Factor into Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells in Vitro
摘要目的：探讨腺病毒载体介导血管内皮生长因子( VEGF)转染脐带间充质干细胞( UCMSCs)的可行性,以及VEGF转染对UCMSCs功能的影响。方法构建VEGF165-EGFP基因重组腺病毒载体,分离和培养UCMSCs,携增强型绿色荧光蛋白( EGFP)的腺病毒载体转染UCMSCs,倒置荧光显微镜下观察细胞转染效果,流式细胞仪检测细胞转染率,确定最佳病毒感染复数( MOI)。将细胞分为VEGF-EGFP转染组、EGFP空载组及对照组3组,依据最佳MOI值转染并收集细胞,采用蛋白印迹法( Western blotting)检测VEGF及Akt表达变化；酶联免疫吸附试验( ELISA)检测VEGF蛋白表达情况。采用CCK-8法评价转染对UCMSCs增殖的影响。结果腺病毒介导的VEGF165-EGFP基因能够成功转染UCMSCs,且VEGF基因在细胞内能够转录和表达,并能分泌到细胞外。转染后48 h VEGF-EGFP转染组VEGF、Akt水平显著高于EGFP空载组和对照组(P<0．05)；转染后48 h采用ELISA法在VEGF-EGFP转染组细胞培养上清中即检测到VEGF的表达和分泌,在转染后第4天达到高峰,且VEGF表达显著高于EGFP空载组及对照组(P<0．01),以后逐渐下降,并稳定表达一定时间。 CCK-8法检测结果显示,介导VEGF基因转染的腺病毒对UCMSCs增殖无明显影响。结论腺病毒介导VEGF基因能够成功转染UCMSCs,保持其原有生物学特性,并能持续高效表达VEGF,为通过VEGF基因联合UCMSCs治疗获得糖尿病下肢血液循环重建的可行性提供理论依据。
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关键词
血管内皮生长因子类脐带间质干细胞腺病毒载体转染Vascular endothelial growth factorUmbilical cord mesenchymal stem cellAdenovirus vectorTransfection
医学主题词
转染(Transfection)脐带(Umbilical Cord)间质干细胞(Mesenchymal Stem Cells)细胞(Cells)血管内皮生长因子A(Vascular Endothelial Growth Factor A)
DOI
10.3969/j.issn.2095-140X.2014.05.002
发布时间
2014-05-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
河北省自然科学基金（H2013505067）
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