p62Dok PTB结构域融合蛋白的表达和纯化
Expression and purification of the GST fusion protein of p62Dok PTB domain
目的:制备p62Dok PTB结构域的GST融合蛋白.方法:用PCR方法扩增编码p62Dok PTB结构域的cDNA, 并将其克隆入表达载体pGEX-4T-3 中,转化大肠杆菌BL-21,构建成表达GST-PTB融合蛋白的菌株.经IPTG诱导表达后,经Glutathion-Sepharose 4B亲和层析柱纯化,用SDS-PAGE进行分析,该融合蛋白的表达量超过菌体总蛋白的25%.结果:获得重组GST-PTB融合蛋白,纯度在95%以上,产物得率约75%.结论:成功制备高纯度p62Dok PTB结构域的GST融合蛋白,为进一步研究p62Dok PTB结构域的结构和生物学功能奠定了基础.
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