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食管癌消减cDNA文库的构建

Construction of subtractive cDNA library of esophageal cancer by using suppression subtractive hybridization

摘要:

目的:采用消减抑制杂交技术,研究正常食管粘膜和食管癌组织之间的基因表达差异状况,分离食管癌相关基因片段,构建食管癌的消减cDNA文库.方法:以食管癌癌组织为测试子(tester),以正常食管粘膜组织为驱赶子(driver),用消减抑制杂交方法分离食管癌差异表达片段.将该差异表达片段克隆至T载体,经蓝白斑筛选后, 再用PCR方法插入片段筛选出阳性重组质粒,构建食管癌消减cDNA文库.结果:用消减抑制杂交技术分离食管癌差异表达片段,经蓝白斑筛选,得到220个白色克隆;再用PCR方法快速筛选出100个两端分别含连接子Adaptorl 及Adaptor2R的阳性重组质粒100个,从而成功地构建了中国人食管癌特异的消减cDNA文库.结论:构建了中国人食管癌特异的消减cDNA文库.消减抑制杂交技术能快速有效地分离差异表达基因,方法简便、灵敏度高.使用PCR法快速筛选阳性克隆,对于消减文库的构建具有重要意义.

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作者: 殷智榕 [1] 张云汉 [1] 陈东 [1] 高冬玲 [1] 姜国忠 [1] 郝志芳 [1]
期刊: 《河南医科大学学报》2001年36卷5期 515-518页 ISTICPKU
分类号: R735.1
栏目名称: 系列研究
DOI: 10.3969/j.issn.1671-6825.2001.05.001
发布时间: 2004-03-05
基金项目:
河南省科技发展计划
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