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三七皂甙Rg1、Rb1对肝纤维化大鼠线粒体DNA三磷酸腺苷酶6、8亚基的作用机制研究

Study on the mitochondrial mtDNA ATPase6、8 gene mutation and on the function mechanism of panax notoginseng saponins Rg1,Rb1 for hepatic fibrosis rats

摘要:

目的:探讨三七皂甙( panax notoginseng saponins,PnS) Rg1、PnS Rb1干预下,肝纤维化大鼠线粒体DNA三磷酸腺苷( adenine triphosphate,ATP)酶6亚基、ATP酶8亚基的基因突变和ATP含量变化。方法96只Wistar大鼠分为对照组、四氯化碳( carbon tetrachloride,CCl4)肝纤维化大鼠模型组、PnS Rg1组、PnS Rb1组各24只。除对照组外,其余3组用5% CCl4橄榄油按5 ml/kg灌胃制作肝纤维化大鼠模型。 PnS Rg1组在每次CCl4灌胃同时腹腔注射PnSRg1(5 mg/kg)。 PnS Rb1组在每次CCl4灌胃同时腹腔注射Rb1(5 mg/kg)。用生物发光法测定各组大鼠实验前及实验开始2、4、6周末时线粒体内ATP含量并比较。提取肝细胞线粒体总RNA,逆转录为互补脱氧核糖核酸( complementary DNA,cDNA),用基因重组、测序,通过GenBank与线粒体 DNA已知序列进行比较,研究PnS Rg1、PnS Rb1干预6周后线粒体 DNA的ATP酶6亚基7904-8584区域和ATP酶8亚基7743-7946区域基因突变情况。结果(1)与对照组相比,模型组大鼠线粒体DNA ATP酶6亚基7904-8584区域有3处突变:C8294G、T8505G、G8584A。用Fisher确切概率法分析,突变增加有显著性意义( P<0.01)。 PnS Rg1组、PnS Rb1组与对照组相比突变增加没有显著性意义( P>0.05)。(2)与对照组相比,ATP酶8亚基7743-7946区域有2处突变:A7797non、T7863C。用Fisher确切概率法分析,突变增加有显著性意义(P<0.01)。 PnS Rg1、Rb1组与对照组相比突变增加没有显著性意义( P>0.05)。(3)各组肝纤维化大鼠线粒体 ATP 含量与 CCl4处理时间的相关性分析,用pearson's 检验r=-0.935,呈负相关。(4)肝纤维化大鼠线粒体内ATP含量与ATP酶6亚基突变的相关性分析,用pearson's 检验r=-0.943,呈负相关;肝纤维化大鼠线粒体内ATP含量与ATP酶8亚基突变的相关性分析,用pearson's检验r=-0.961,呈负相关。结论 PnS Rg1、Rb1可以显著抑制线粒体ATP含量下降,可以显著抑制线粒体DNA ATP酶6亚基、ATP酶8亚基突变,从而推断PnS Rg1、Rb1可能通过减少线粒体DNA ATP酶6、8亚基突变而抑制线粒体ATP含量下降,从而延缓肝纤维化发生发展。

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