应用抑制性消减杂交技术克隆乙型肝炎病毒DNAPTP1的反式调节基因-论文-万方医学网

应用抑制性消减杂交技术克隆乙型肝炎病毒DNAPTP1的反式调节基因

Cloning of hepatitis B virus DNAPTP1 transactivating genes by suppression subtractive hybridization technique

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摘要：

目的:应用抑制性消减杂交技术及生物信息学技术筛选并克隆乙型肝炎病毒DNAPTP1反式激活的新型靶基因.方法:以HBV DNAPTP1表达质粒pcDNA3.1(-)-DNAPTP1转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为对照;制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,经Rsa Ⅰ酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性聚合酶链反应(PCR),将产物与pGEM-Teasy载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析.结果:成功构建DNAPTP1反式激活基因差异表达的cDNA消减文库.文库扩增后得到60个白色克隆,经菌落PCR分析,得到32个200-1 000 bp插入片段.对所得片段测序,并进行同源性分析,获得3个差异表达的已知蛋白基因和4个未知功能的染色体序列.结论:筛选到的cDNA全长序列,包括一些与细胞生长调节、物质代谢、免疫及细胞凋亡密切相关的蛋白编码基因,推测了DNAPTP1可能存在的调控机制的线索.

作者： 高学松 ^[1] 成军 ^[1] 甄真 ^[2] 郭江 ^[1] 张黎颖 ^[1] 陶明亮 ^[1]

作者单位： 北京地坛医院传染病研究所,北京市,100011 ^[1] 河北医科大学第三医院感染科,河北省,石家庄市,050051 ^[2]

期刊：《世界华人消化杂志》2005年13卷19期 2371-2374页 ISTIC

关键词：乙型肝炎病毒 DNA聚合酶反式调节抑制性消减杂交

主题词：性(Sex)乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus)基因, 调节(Genes, Regulator)聚合(Polymerization)基因(Genes)

分类号： R5

栏目名称： 研究快报

DOI： 10.3969/j.issn.1009-3079.2005.19.018

发布时间： 2006-07-31

基金项目：

中国科学院资助项目 军队科技攻关项目 军队科研项目 军队科技攻关项目 军队科技攻关项目

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