换一批His-TAT-mCherry融合蛋白的跨膜转导及其在细胞内的定位
Membrane translocation and location in cells of red fluorescent protein fusion vector incorporated HIV-TAT protein
摘要目的 构建在原核中表达的人类免疫缺陷病毒转录活化因子(HIV-TAT)红色荧光蛋白(mCherry)融合表达载体,荧光显微镜观察HW-TAT的跨膜转导及其在细胞内的定位,为进一步研究HW-TAT的跨膜转导机制及其定位提供重要工具. 方法 采用基因重组技术构建含HIV-TAT以及红色荧光蛋白的质粒pET14b-His-TAT-mCherry,对阳性克隆进行PCR、酶切和测序鉴定,将该质粒转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞,使其在体外表达,并进行纯化、除菌.将纯化的His-TAT-mCherry融合蛋白与Hela细胞共同孵育,荧光显微镜下观察. 结果 PCR、双酶切和DNA测序证明所构建质粒正确;表达纯化出了高纯度的His-TAT-mCher-ry融合蛋白.荧光显微镜下见Hela细胞中红色荧光蛋白主要分布在胞质中,细胞膜上也有一定分布. 结论 成功构建了pET14b-His-TAT-mCherry原核表达质粒,纯化了高纯度的His-TAT-mCherry融合蛋白,该蛋白在哺乳动物细胞中有跨膜转导活性,为研究HIV-TAT的跨膜转导机制提供了一个重要的工具.
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分类号
R318（医用一般科学）
栏目名称
DOI
10.3321/j.issn:0577-7402.2009.02.007
发布时间
2009-04-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（30670829）
国家高技术研究发展计划（863计划）（2001AA234061）
广东省科技计划（A1090202）
广州市科技计划（200223-C7081.2007J1-C3D301）
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