换一批mTOR特异性siRNA重组表达载体的构建及鉴定
Construction and identification of mTOR specific siRNA recombinant expression vector
摘要目的：构建mTOR siRNA 重组表达载体，为探讨RNA干扰技术抑制巨噬细胞 mTOR 基因的相关研究奠定基础。方法设计具有短发夹结构的DNA序列,经退火成互补双链,再克隆至载体pGPU6/GFP/Neo中构建重组表达载体,转化DH5α菌株,提取质粒行酶切鉴定后,并进行序列测定。再转染入巨噬细胞RAW264.7,进行荧光摄像和阳性克隆筛选。Western blot方法检测巨噬细胞mTOR蛋白表达。结果 DNA 测序结果及 PCR 鉴定证实成功构建小鼠 mTOR siRNA 重组表达载体。Western blot结果显示转染该重组载体的巨噬细胞mTOR蛋白表达下降约41%。结论 mTOR靶向RNA干扰重组表达载体构建成功,可以进行稳定筛选，该载体对巨噬细胞mTOR蛋白表达有抑制作用。
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DOI
10.3969/j.issn.1674-1129.2013.06.003
发布时间
2013-12-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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