人CD81胞外大环在大肠杆菌中的克隆表达及活性研究
Cloning and expression of human CD81 major extracellular loop in E.coli and its activity
目的:构建人CD81分子胞外大环(EC2)的原核表达质粒,并研究胞外大环同HCV E2蛋白的结合性能.方法:从人外周血淋巴细胞中经RT-PCR克隆出CD81胞外大环序列,插入原核表达载体pBVIL1中,构建表达质粒pBVIL1-EC2并在大肠杆菌中表达.表达产物经纯化后用间接ELISA法测定同E2蛋白的结合能力.结果:经序列测定证明,CD81分子胞外大环正确插入载体.融合蛋白得到高效表达,以包涵体形式存在,经Q-Sepharose FF阴离子交换柱得到有效纯化.初步结果表明,重组CD81胞外大环能同原核表达的截短的HCV E2(384-661)蛋白结合.结论:本研究为进一步研究CD81同E2及HCV的相互作用和制备抗EC2单克隆抗体奠定了基础.
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