换一批shRNA真核表达质粒介导的RNA干扰对人结肠癌LoVo细胞mTOR基因表达的抑制作用
Inhibition Effect of RNA Interference with Eukaryotic Expression Plasmids Containing shRNA on mTOR Gene Expression in Human Colon Cancer LoVo Cell Line
摘要目的 探讨shRNA真核表达质粒介导的RNA干扰技术对人结肠癌LoVo细胞哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)基因表达的抑制作用.方法 合成编码shRNA的特异性DNA序列,连接到质粒pGenesil-1,采用脂质体LipofectamineTM 2000转染LoVo细胞,G418筛选4周.根据转染质粒的不同,实验分为3组:A组(正常对照组)为未转染的正常培养LoVo细胞,B组(阴性对照组)为转染pGenesil-1空载体质粒,C组(阳性实验组)为转染质粒pGenesil-1-mTOR.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测LoVo细胞mTOR基因mRNA表达,免疫印迹(Western blot)法检测mTOR蛋白表达.结果 双酶切产物琼脂糖凝胶电泳显示,重组质粒pGenesil-1-mTOR和空载体质粒pGenesil-1分别切出一条410、350 bp大小的片段.G418筛选的转染细胞在倒置荧光照相显微镜下可观察到绿色荧光.C组LoVo细胞mTOR基因mRNA表达水平明显低于A组(P<0.05),表达抑制率为73.0%.C组LoVo细胞mTOR蛋白表达水平明显低于A组(P<0.05),表达抑制率为72.5%.结论 shRNA真核表达质粒介导的RNA干扰可明显抑制人结肠癌LoV0细胞mTOR基因表达.
更多相关知识
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1000-2294.2008.04.003
发布时间
2008-11-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
- 浏览0
- 被引2
- 下载0
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
