重组腺病毒载体Ad5-EGFP感染人树突状细胞的研究

Infecting Human Dendritic Cells with Ad5-EGFP Recombinant Adenovirus Vectors

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摘要目的探讨重组腺病毒载体Ad5-EGFP感染人树突状细胞(dendritic cell,DC)的最佳条件.方法采用密度梯度离心法分离健康成人外周血中的单个核细胞(PBMC),再以黏附法分离出单核细胞,加入重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、重组人白细胞介素-4 (rhIL-4)、重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)等细胞因子诱导培养出DC,动态观察细胞形态,流式细胞仪检测其表面标志.Ad5-EGFP以梯度感染复数值(MOI)10、100、200、400、600、800、1000 pfu/cell感染人DC,于感染后24、48 h,荧光倒置显微镜观察增强的绿色荧光蛋白(EGFP)表达,KS400型图像分析仪测定感染后48 h的感染效率.结果 MOI从10～800 pfu/cell时,EGFP阳性细胞数量逐渐增多,感染效率和病毒滴度呈量效关系,当MOI为800 pfu/cell时可获得较佳的感染效率,EGFP阳性细胞数量达到峰值,感染率达到95.25% .结论 Ad5-EGFP是感染人DC的较理想载体,通过选择恰当的MOI值能提高细胞对重组腺病毒的摄入,从而提高感染效率.