miR-1腺病毒载体的构建及表达分析

Establishment and Expression Analysis of miR-1 Adenovirus Vector

二维码有效期 120s

摘要目的构建并鉴定microRNA-1(miR-1) 的腺病毒表达载体.方法 PCR扩增含大鼠miR-1前体的DNA片断,并将其克隆到腺病毒穿梭质粒pAdTrack.pAdTrack经Pme I酶切线性化后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183菌中进行同源重组.重组质粒pAd-precusor-miR-1线性化后,转染293A细胞,进行病毒包装,得到重组腺病毒颗粒Ad-miR-1.Ad-miR-1与Ad-GFP病毒转染培养的乳鼠心肌细胞,通过实时荧光定量PCR方法检测miR-1的表达效率.结果基因测序及酶切鉴定证实重组Ad-precursor-miR-1腺病毒载体构建成功;腺病毒Ad-miR-1转染心肌细胞后,实时荧光定量PCR方法证实腺病毒Ad-miR-1能够显著提高心肌细胞内miR-1的表达水平.结论利用同源重组的方法构建的miR-1腺病毒能够提高心肌细胞内miR-1的表达水平.

作者许旭东 ^[1] 宋晓伟 ^[1] 李青 ^[2] 林丽 ^[3] 袁文俊 ^[3] 荆清 ^[4] 秦永文 ^[1] 学术成果认领

作者单位第二军医大学长海医院心血管内科,上海,200433 ^[1] 中国科学院上海生命科学研究院健康科学研究所,上海,200025 ^[2] 第二军医大学生理学教研室,上海,200433 ^[3] 第二军医大学长海医院心血管内科,上海,200433;中国科学院上海生命科学研究院健康科学研究所,上海,200025 ^[4]

关键词心肌细胞腺病毒 microRNAs miR-1

主题词肌细胞, 心脏(Myocytes, Cardiac)方法(Methods)质粒(Plasmids)转染(Transfection)同源重组(Homologous Recombination)

分类号 R542.2

DOI 10.3969/j.issn.1000-2294.2010.08.001

发布时间 2011-01-14

基金项目

国家自然科学基金（30828006）