换一批家蚕过敏原细胞视黄酸结合蛋白（CRABP）的克隆表达及生物学分析
Cloning,Expression and Bioinformatics Analysis of Cellular Retinoic Acid Binding Protein(CRABP)in Silkworm,Bombyx Mori
摘要目的：研究家蚕细胞视黄酸结合蛋白（CRABP）的原核克隆表达及生物学意义。方法家蚕总 RNA 提取；根据 ref｜NM-001043899｜设计引物；RT-PCR 扩增；PET-28a 质粒目的基因表达载体的构建，转化大肠杆菌 BL21（DE3）；Western bolt 检测重组 CRABP；采用 MEGA5工具包和 clustalw2进行同源性分析；采用 ProtParam Tools预测 CRABP 的理化性质；采用 PSIPRED 和 SWISS-MODEL 预测其蛋白质结构。利用 Preprod、IEDB 和 DNAStar对 CRABP 蛋白 T、B 细胞抗原表位进行预测。结果克隆出家蚕 CRABP 基因开放阅读框399 bp，编码132个氨基酸。CRABP 工程菌（DE3）经 IPTG 诱导高效表达 CRABP 重组的可溶性蛋白，分子量约18 kDa。重组 CRABP能够与家蚕过敏患者血清 IgE 结合。测序证明克隆的家蚕 CRABP 蛋白与黑脉金斑蝶细胞视黄酸结合蛋白（gb｜EHJ79039．1｜）同源性为94％。系统进化树结果显示家蚕与小菜蛾亲缘关系比较近。理化性质预测显示 CRABP蛋白质较稳定。二级结构及三级结构预测结果显示 CRABP 的结构主要以β折叠组成。T 细胞抗原表位预测得到4个肽序列（4-12、20-29、51-59、80-88）。B 细胞抗原表位预测得到4个肽序列（1-16、40-55、67-82、105-120）。结论克隆并表达的家蚕 CRABP 蛋白具有良好的变应原性，为进一步研究家蚕过敏原的结构成分及其理化性质奠定理论基础。
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关键词
家蚕细胞视黄酸结合蛋白原核表达变应原性鉴定生物信息学分析Bombyx moricellular retinoic acid binding proteinprokaryotic expressionimmunological identificationbioinformatics analysis
栏目名称
DOI
10.13764/j.cnki.ncdm.2016.05.005
发布时间
2017-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
卫生部公益性行业科研专项（No．2015SQ00136）
广东省工程技术研究开发中心项目（No．2013158925）
广东省对外科技合作项目（No．2013B051000088）
深圳市科技计划基础研究项目（JCYJ20140828163633991）
深圳市科技计划基础研究项目（JCYJ20140418095735604）
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