换一批小龙虾钙结合蛋白的免疫学特性鉴定与单克隆抗体的制备
Identification of Immunological Characteristics and Preparation of Monoclonal Antibodies against SCP Allergen from Procambarus Clarkii
摘要目的 克隆、表达、纯化具有免疫原性的重组小龙虾钙结合蛋白(SCP),并制备高效价抗SCP单克隆抗体.方法 用亲和层析法获取小龙虾重组SCP,通过Western Blotting 和ELISA法进行免疫学活性鉴定;以重组SCP为免疫原,免疫BALB/c小鼠,再取小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞NS-1进行细胞融合;利用ELISA法筛选出能分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞,然后利用该杂交瘤细胞株刺激小鼠,取腹水,用蛋白A亲和层析方法纯化获得抗体;通过Ig类/亚类鉴定ELISA试剂盒鉴定该单克隆抗体的Ig亚型;通过Western Blot和间接ELISA法鉴定单克隆抗体的交叉性和特异性.结果 经SDS-PAGE鉴定获得了纯度较高的重组SCP,免疫学鉴定结果显示,重组的SCP蛋白具有较好的IgE结合活性,阳性率为40%.通过杂交瘤细胞融合技术,共获得了抗SCP细胞株2株,分别命名为1A12和3H12,效价均高于20万.经抗体亚型鉴定,2株抗体均为IgG1型.Western Blot的结果表明2株抗体能识别重组SCP.在特异性检测实验中,1A12抗体与其他种类食物过敏原无交叉反应,而3H12与鱼粗蛋白过敏原有交叉反应性.结论 SCP是小龙虾的重要过敏原,本实验获得了纯度较高的重组SCP,并制备了2株高效价抗SCP单克隆抗体,为小龙虾SCP、甲壳类食物过敏原的检测及标准化过敏原物质的制备奠定了基础.
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关键词
小龙虾钙结合蛋白免疫学特性鉴定单克隆抗体Procambarus clarkiisarcoplasmic calcium-binding proteinimmunological characteristicsidentificationmonoclonal antibody
医学主题词
抗体, 单克隆(Antibodies, Monoclonal)蛋白(Egg White)钙(Calcium)变态反应和免疫学(Allergy and Immunology)细胞(Cells)
分类号
R392-33（医学免疫学）
栏目名称
DOI
10.13764/j.cnki.ncdm.2017.02.008
发布时间
2017-06-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
深圳市科技计划基础研究项目（JCYJ20140418095735604）
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