摘要目的 探讨p120-连环蛋白(p120cnt)表达对急性肝衰竭(ALF)内皮损伤和炎性激活的影响,分析p120cnt的抗炎效应是否可以通过对Epac1信号通路的调控来发挥作用.方法 查询GenBank中大鼠p120cnt cDNA文库,设计引物,PCR扩增目的基因,琼脂糖电泳鉴定结果.经酶切、连接克隆至带绿色荧光蛋白(GFP)的表达载体,转化E.Coli JM109并筛选阳性菌落,提取重组质粒后酶切,测序验证,确保表达框无误.选择健康雄性Wistar大鼠36只,按随机数字表法分为正常对照组、ALF模型组、质粒转染+ALF建模组,每组12只.脂多糖(LPS)联合D-GalN法构建ALF动物模型,使用裸质粒流体力学基因转染法转染大鼠,肝组织切片荧光显微镜观察转染是否成功.以上处理12 h后处死大鼠取肝组织切片进行HE染色及TUNEL分析,评估各组肝细胞坏死程度;半定量RT-PCR评估各组肝组织p120cnt mRNA及Epac1 mRNA表达水平.结果 PCR扩增目的基因,1.2％琼脂糖电泳显示目的基因约2800 bp.真核表达重组体pCMV/p120ctn提取质粒后酶切,酶切产物基因测序显示质粒构建正确.基因转染后大鼠肝组织切片内可见大量GFP表达说明转染已成功.大鼠肝组织切片HE染色及TUNEL分析说明质粒转染+ ALF建模组肝细胞坏死严重程度低于ALF模型组.大鼠肝组织p120cntmRNA表达强弱顺序为:正常对照组＞质粒转染+ ALF建模组＞ALF模型组(均P＜0.01).大鼠肝组织Epac1 mRNA表达强弱顺序为:质粒转染+ ALF建模组＞ALF模型组＞正常对照组(P＜0.05或P＜0.01).结论 p120cnt存在对ALF的抗炎作用和肝保护作用;p120cnt对肝组织急性炎症的抑制效应与上调Epac1基因表达有关.