换一批橡胶树红根病菌GPFTR1基因的克隆、亚细胞定位与表达分析
Cloning, Subcellular Localization and Expression Analysis of GPFTR1 Gene from Ganoderma pseudoferreum
摘要高亲和性铁通透酶FTR1是参与铁元素由胞外转移到胞内过程的重要铁转运蛋白.为了解橡胶树红根病菌(Ganoderma pseudoferreum (Wakef.) V.Over.et Steinm)的高亲和性铁通透酶编码基因GPFTR1,通过同源克隆技术,从橡胶树红根病菌中克隆得到GPFTR1的基因序列,并对其编码的氨基酸序列进行蛋白理化性质分析、保守结构域及跨膜区分析和系统进化树分析,并构建植物表达载体pBIN-GPFTR1-GFP进行该蛋白的亚细胞定位分析.利用生长速率法测定己唑醇和青蒿琥酯对橡胶树红根病菌的抑制率,并在EC50条件下进行橡胶树红根病菌的GPFTR1基因表达分析.结果 表明,该基因编码区全长1 191 bp,编码396个氨基酸,推测其分子量为43.23 kD,等电点为6.92,为疏水性蛋白,具有保守基团REXLE和7个跨膜结构域;系统进化树分析显示GPFTR1与紫芝(Ganoderma sinense J.D.Zhao,L.W.Hsu&X.Q.Zhang)同类基因(登录号PIL27756.1)的亲缘关系最近,氨基酸同源性为89％;亚细胞定位结果显示GPFTR1蛋白定位在细胞膜上;生长速率法测定己唑醇和青蒿琥酯EC50分别为0.192 mg/L、26.288 mg/L;实时荧光定量PCR技术检测到GPFTR1蛋白编码基因分别在红根病菌受己唑醇和青蒿琥酯胁迫处理6h和4h表达量最高.为进一步研究橡胶树红根病菌G PFTR1基因功能提供了理论参考,对橡胶树红根病的防治具有重要意义.
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