换一批E2F-1基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定
Construction and identification of lentiviral vector of RNA interference of E2F-1 gene
摘要目的:构建和鉴定靶向E2F-1基因的RNA干扰慢病毒载体.方法:体外合成两对互补并编码靶向E2F-1基因的特异性短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)序列和一个阴性对照组的寡核苷酸,克隆到pLKO.1-PURO-U6(Age I/EcoR I)质粒载体中,经酶切和测序鉴定所构建的重组载体是否正确,将以上质粒分别和包装质粒混合物共转染293T细胞,包装产生病毒颗粒.各组病毒载体转染Tca8113细胞后,运用Real-Time PCR 和Western检测三组E2F-1 mRNA和蛋白的表达水平.结果:经酶切和测序证明,pLKO.1-PURO-U6-E2F-1shRNA序列正确;转染后,各组慢病毒载体中,第一组质粒感染后的Tca8113细胞中E2F-1基因的核酸电泳条带明显减弱,Western检测出E2F-1蛋白的表达降低.结论:靶向E2F-1基因的shRNA慢病毒载体构建成功,并可特异性沉默E2F-1基因的表达,为研究E2F-1在口腔鳞癌的发生发展中的作用提供了初步的实验基础.
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DOI
10.3969/j.issn.1674-8603.2011.01.004
发布时间
2011-05-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
江苏省卫生厅卫生科研项目（(H200811)）
江苏省高校自然科学研究基金（(08KJB320008)）
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