换一批下调EMS1/cortactin对人高转移潜能肝癌细胞株迁移和内吞的影响
Downregulating EMS1/cortactin inhibits migration and endocytosis of MHCC-97H
摘要目的 观察下调人高转移潜能肝癌细胞株(MHCC-97H)中EMS1/cortactin对细胞迁移和内吞的影响,探讨EMS1/cortactin在细胞内可能存在的功能.方法 构建靶向EMS1的shRNA真核表达质粒(EMS1-PSilencer4.1-GFP-shRNA,EMS1-shRNA);通过Lipofectamine 2000处理后将EMS1-shRNA转染MHCC-97H细胞,免疫荧光显微镜下观察转染效率;采用RT-qPCR和Westen blot分别检测EMS1 mRNA和cortactin蛋白表达水平;利用划痕、Transwell小室实验、转铁蛋白(transferrin,Tfn)内吞实验分别研究细胞迁移和内吞作用.结果 成功构建EMS1-shRNA.免疫荧光显微镜下见转染细胞中明显的绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP),荧光强度在48 h达到峰值,其转染效率达84.76%.与未处理组相比,转染EMS1-shRNA细胞中EMS1 mRNA水平下降至19.00%,cortactin蛋白水平下降至36.74%、细胞相对迁移距离下降至55.52%、相对穿膜细胞数下降至27.79%、细胞内吞荧光标记Tfn水平显著减弱(P均<0.05).结论 下调EMS1/cortactin后,MHCC-97H细胞迁移、内吞能力明显下降,提示EMS1/cortactin与原发性肝癌(primary human heptatocellular,HCC)转移的生物学行为有关.
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分类号
R735.7（消化系肿瘤）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1001-7399.2012.11.014
发布时间
2013-02-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
江苏高校优势学科建设工程项目（201229）
江苏省卫生厅项目（H201052;K2009060）
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