摘要间接法免疫荧光双重染色(indirect immunofluorescence double-staining)是用未标记荧光素的两种不同种属一抗孵育组织或细胞,再用两种不同荧光素标记的荧光二抗孵育组织或细胞,在普通荧光显微镜/激光共聚焦显微镜下选择两种相应的激发光进行观察,从而对两种抗原分别进行定位和定量的方法。目前,随着Alexa Fluor 新型窄谱染料[1]和激光共聚焦显微镜技术的广泛应用[2],石蜡切片免疫荧光染色技术的应用越来越广泛。但研究表明石蜡切片组织血管腔内红细胞、血浆蛋白因甲醛残留,易出现非特异性强荧光,对实验结果造成明显干扰[3]。作者以小鼠胰腺石蜡切片组织胰岛素(Insulin)和胰高血糖素(Glucagon)蛋白进行免疫荧光双重染色为例,首次用混合血清封闭的方法降低石蜡组织内非特异性荧光背景,现介绍如下。
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