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SIRT6调控细胞糖代谢对非小细胞肺癌A549细胞放射敏感性的影响

Effects of SIRT6 on glucose metabolism and regulation of radiosensitivity in non-small cell lung cancer A549 cells

摘要:

目的 探讨沉默信息调节蛋白6(SIRT6)调控细胞糖代谢对非小细胞肺癌A549细胞放射敏感性的影响.方法 构建过表达SIRT6的腺病毒载体Ad-SIRT6,采用荧光实时定量PCR(QPCR)检测经不同转染强度(0、25、50、100、200pfu/细胞)Ad-SIRT6转染24 h后的SIRT6 mRNA水平;根据实验设计分为对照组、空载体(Ad-null)组及过表达(Ad-SIRT6)组,Ad-null组和Ad-SIRT6组的病毒浓度均为200 pfu/细胞;采用克隆形成实验检测3组经0、2、4、6、8和10 Gy X线照射后的存活分数(SF),根据多靶单击模型绘制细胞存活曲线并计算增敏比(SER);流式细胞术检测3组经4GyX线照射48 h的细胞周期和凋亡情况;采用QPCR检测经4GyX线照射48 h各组丙酮酸激2(PKM2)、乳酸脱氢酶A(LDHA)和己糖激酶(HK)的表达水平;葡萄糖试剂盒检测转染12、24、36、48 h后的培养基葡萄糖消耗水平.结果 QPCR检测显示,在25~200 pfu/细胞的范围内,随转染强度的增加,A549细胞的SIRT6 mRNA水平升高(P<0.001),0、25、50、100、200 pfu/细胞对应的SIRT6mRNA水平依次为1.012±0.016、1.356±0.185、2.243±0.695、4.887±1.169和7.241±1.425,50、100、200 pfu/细胞对应的SIRT6 mRNA水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).后续实验选择过表达效果最强的200 pfu/细胞转染量.克隆形成实验显示,Ad-null组和对照组经0、2、4、6、8、10 Gy X线照射后SF的差异无统计学意义(P>0.05);而Ad-SIRT6组经4~10 Gy X线照射后的SF均低于Ad-null组和对照组(P<0.05).多靶单击模型拟合细胞存活曲线提示SER为1.76.与对照组和Ad-null组比较,Ad-SIRT6组的Go/G1期细胞比例和凋亡率升高,S期细胞比例及PKM2、LDHA和HK mRNA水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05);Ad-SIRT6组转染12、24、36、48 h的葡萄糖消耗量降低,低于对照组和Ad-null组(P<0.05).结论 SIRT6过表达可抑制A549细胞糖酵解过程中关键酶生成来抑制糖酵解过程,同时具有放射增敏作用,并可导致Go/G1期阻滞和细胞凋亡.

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