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shRNA靶向沉默ST8SIA4基因表达对乳腺癌细胞侵袭和迁移的影响

Effects of shRNA silencing ST8SIA4 gene expression on invasion and migration of breast cancer cells

摘要:

目的 探讨短发夹RNA(shRNA)靶向沉默α2,8-唾液酸转移酶4(ST8SIA4)表达对乳腺癌BT549细胞侵袭、迁移的影响.方法 采用实时荧光定量PCR(QPCR)和Western blotting检测乳腺癌BT549细胞和乳腺正常上皮MCF-10A细胞中ST8SIA4 mRNA和蛋白水平.采用LipofectamineTM2000向BT549细胞随机转染成功构建的靶向沉默ST8SIA4表达的shRNA载体片段(沉默组)或无义shRNA片段(对照组),转染48 h后采用QPCR检测ST8SIA4 mRNA水平,Western blotting检测ST8SIA4、磷酸化丝/苏氨酸蛋白激酶(p-Akt)、神经纤毛蛋白2(NRP2)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达情况,Transwell实验和划痕实验分别检测细胞的侵袭和迁移能力.结果 与MCF-10A细胞相比,BT549细胞的ST8SIA4 mRNA和蛋白水平均升高(P<0.05).转染48 h后,沉默组的ST8SIA4 mRNA和蛋白水平分别为0.19±0.02和0.13±0.02,均低于对照组的0.98± 0.11和0.52±0.05(P<0.05);沉默组的侵袭细胞数、迁移率及p-Akt、NRP2和TNF-α蛋白相对表达量分别为(39.5±4.2)个、(16.9±1.3)%、0.22±0.03、0.31±0.04和0.27±0.06,均低于对照组的(91.3±8.5)个、(38.4±3.9)%、0.58±0.07、0.55±0.05和0.46±0.05,差异有统计学意义(P<0.05).结论 ST8SIA4基因在乳腺癌BT549细胞中高表达,沉默其表达可抑制侵袭和迁移过程,可能与上调p-Akt、NRP2和TNF-α蛋白表达有关.

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