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微小RNA-924靶向调控Cdc42表达及对肝癌细胞迁移和侵袭的影响

Targeted regulation of microRNA-924 on Cdc42 expression and its effect on migration and invasion of hepatic carcinoma cells

摘要:

目的 探讨微小RNA-924(miR-924)对细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)表达的靶向调控及肝癌SK-Hep-1细胞迁移和侵袭的影响.方法 采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测肝癌细胞株SK-Hep-1和正常肝细胞株LO2中miR-924的表达情况.采用Lipofectamine 2000向SK-Hep-1细胞转染miR-924模拟物(mimics组)和阴性对照序列(NC组),以不行任何转染的细胞为对照组.采用QPCR检测各组细胞的miR-924水平以评价转染效率,MTT法检测增殖活性,Transwell小室实验和划痕实验评价侵袭和迁移情况,QPCR和Western blotting法检测Cdc42水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR-924对Cdc42的靶向调控作用.结果 QPCR检测显示,SK-Hep-1细胞中miR-924的水平为0.198±0.095,低于LO2细胞的1.025±0.135(P<0.05).对照组、NC组和mimics组的miR-924水平为1.019±0.109、1.078±0.126和2.235±0.265,mimics组的miR-924水平高于对照组和NC组(P<0.05).与其余两组相比,mimics组SK-Hep-1细胞增殖活力明显减弱,其中转染48~ 72 h的差异有统计学意义(P<0.05).对照组、NC组和mimics组的划痕愈合率分别为(50.2±2.6)%、(52.4±3.7)%和(27.1±2.7)%,穿膜细胞数分别为(165.9±8.4)、(172.0±11.2)和(67.5±7.4)个,mimics组的划痕愈合率和穿膜细胞数均低于其余两组(P<0.05).双荧光素酶报告基因检测实验证实Cdc42是miR-924的直接作用靶点.与其余两组相比,mimics组的Cdc42 mRNA和蛋白水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 低表达的miR-924参与了肝癌的发生、发展,上调其水平可抑制肝癌细胞的增殖活性及侵袭、迁移能力,可能是通过靶向下调Cdc42水平来完成的.

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