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miR-125a-5p靶向调控HER-2表达抑制乳腺癌细胞生物学活性

miR-125a-5p targeted regulation of HER-2 expression and inhibition of biological activity of breast cancer cells

摘要:

目的 探讨miR-125a-5p对人表皮生长因子受体2(HER-2)基因的靶向调控作用以及对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡、周期的影响.方法 收集2017年10月至2018年3月在我院保存的57例乳腺癌组织及对应癌旁组织,提取总RNA,实时荧光定量PCR(QPCR)检测miR-125a-5p表达.向MCF-7细胞转染miR-125a-5p mimics(miR-125a-5p组)或空质粒(阴性对照组),同时设置空白对照组.采用MTT法和流式细胞术检测各组细胞增殖、凋亡和周期.采用双荧光素酶报告实验验证HER-2与miR-125a-5p的靶向关系.采用QPCR和Westem blotting检测各组转染48 h后HER-2 mRNA和蛋白表达.结果 乳腺癌组织中miR-125a-5p表达量为0.58±0.12,低于对应癌旁组织的0.98±0.17,差异具有统计学意义(P<0.05).miR-125a-5p表达与HER-2表达、肿瘤直径、TNM分期有关(P<0.05).MCF-7细胞和MCF-10A细胞中miR-125a-5p的表达量分别为0.73±0.15和1.24±0.18,差异有统计学意义(P<0.05).培养24、48、72、96后,miR-125a-5p组MCF-7细胞的增殖率分别为(87.65±5.79)%、(79.34±7.18)%、(70.17±6.21)%和(64.28±5.93)%,明显低于阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05).miR-125a-5p组细胞Go/G1期细胞比例为(61.95±3.49)%,S期细胞比例为(22.57±2.76)%,与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05).miR-125a-5p组细胞凋亡率为(20.33±6.25)%,高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05).miR-125a-5p可抑制野生型HER-23’-UTR报告基因载体的荧光素酶活性,而对突变型HER-23’-UTR的荧光素酶活性无影响.miR-125a-5p组HER-2 mRNA和蛋白表达水平分别为0.56±0.15和0.41±0.11,低于阴性对照组(P<0.05).结论 上调miR-125a-5p可抑制HER-2的表达,从而抑制乳腺癌细胞增殖凋亡活性,其有望成为乳腺癌早期诊断和个体化治疗的潜在靶点.

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