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微小RNA-146a-5p对肝癌细胞侵袭迁移和ZBTB2表达的影响

Effect of microRNA-146a-5p on invasion, migration and expression of ZBTB2 of hepatoma cells

摘要:

目的 探讨微小RNA-146a-5p(miR-146a-5p)对肝癌细胞侵袭、迁移和含锌指和BTB结构域2( ZBTB2)表达的影响.方法 采用实时定量PCR(QPCR)检测人正常肝细胞LO2和肝癌细胞SMMC-7721的miR-146a-5p水平;体外常规培养SMMC-7721细胞进行转染,根据转染物不同分为增强转染组(转染miR-146a-5p mimics)、抑制转染组(转染miR-146a-5p in-hibitor)和空白转染组(转染脂质体).采用实时定量PCR(QPCR)、四甲基偶氮噻唑蓝( MTT)比色法、Transwell细胞迁移和侵袭实验以及Western blotting检测miR-146a-5p水平、增殖活力、穿膜细胞数和ZBTB2水平;将含ZBTB2基因3’端非翻译区(3’ UTR)特定种子序列克隆至荧光素酶报告质粒psiCHECK-2并通过双荧光素酶报告基因系统验证miR-146a-5p与ZBTB2的靶向关系.结果 SMMC-7721细胞的miR-146a-5p水平为0. 156±0. 047,低于LO2细胞的1. 157±0. 413(P<0. 05).与空白转染组的1. 241±0. 375相比,增强转染组的miR-146a-5p水平升高至8. 159±1. 274,而抑制转染组则降低至0. 219±0. 036;与空白转染组相比,增强转染组转染48、72 h后的增殖活力降低,而抑制组则升高;细胞侵袭实验中,与空白转染组的(22. 069±3. 152)个相比,增强转染组的穿膜细胞数降低至(11. 847±2. 031)个,而抑制转染组则升高至(69. 540±4. 257)个;细胞迁移实验中,与空白转染组的(47. 338±5. 067)个相比,增强转染组的穿膜细胞数降低至(29. 640±3. 652)个,而抑制转染组则升高至(136. 426 ±18. 469)个;与对照组的0. 564 ± 0. 089 相比,增强转染组的 ZBTB2 水平降低至0. 168 ± 0. 023,而抑制组则升高至 0. 826 ± 0. 157;以上组间差异均有统计学意义(P<0. 05).经miR-146a-5p mimics处理后,转染野生型ZBTB2 3’UTR质粒细胞的相对荧光强度低于转染突变型质粒(P<0. 05).结论 miR-146a-5p在肝癌细胞中低表达并发挥抑癌作用,该miRNA可能通过靶向ZBTB2来抑制迁移侵袭能力,在肝癌靶向治疗中有一定应用前景.

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