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miR-150靶向调控c-FLIP对结肠癌HT-29细胞自噬影响的实验研究

Experimental study on the effect of miR-150 on autophagy in colon cancer HT-29 cells by targeting the reg-ulation of c-FLIP

摘要:

目的 探讨上调结肠癌细胞miR-150表达对自噬的影响以及可能调控机制.方法 体外培养HT-29细胞,转染miR-150 mimics或细胞型Fas相关死亡域样白介素-1β转换酶抑制蛋白(c-FLIP)基因,分为空白对照组、阴性对照组、miR-150 mimics组和miR-150 mimics+c-FLIP组,实时荧光定量PCR(qPCR)鉴定转染效果.qPCR检测各组miR-150和c-FLIP mRNA表达;Western blotting检测各组自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3-Ⅱ)、Beclin 1以及c-FLIP蛋白表达.采用细胞免疫荧光染色观察各组细胞自噬的情况.采用双荧光素酶报告实验验证miR-150与c-FLIP的靶向关系.结果 miR-150 mimics组和miR-150 mimics+c-FLIP组miR-150表达水平分别为2.25±0.13和2.19±0.16,均高于空白对照组的1.00±0.09和阴性对照组的1.02±0.13,差异有统计学意义(P<0.05).miR-150 mimics组c-FLIP mRNA和蛋白表达水平明显低于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05);而miR-150 mimics+c-FLIP组c-FLIP mRNA和蛋白表达水平均高于空白对照组、阴性对照组和miR-150 mimics组,差异有统计学意义(P<0.05).miR-150 mimics组细胞Beclin 1、LC3-Ⅱ蛋白表达量明显高于空白对照组和阴性对照组;miR-150 mimics+c-FLIP组细胞Beclin 1、LC3-Ⅱ蛋白表达量低于空白对照组、阴性对照组和miR-150 mimics组.miR-150 mimics组自噬细胞阳性率为(52.92±6.63)%,高于空白对照组的(33.54±5.40)%和阴性对照组的(31.05±4.97)%,差异有统计学意义(P<0.05);miR-150 mimics+c-FLIP组自噬细胞阳性率为(22.50±4.38)%,低于空白对照组、阴性对照组、miR-150 mimics组.双荧光素酶报告基因实验证实c-FLIP是miR-150的下游靶基因.结论 上调miR-150表达可通过负性调控c-FLIP提高结肠癌细胞HT-29的自噬活性.

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作者: 聂双发 [1] 李磊 [1] 王韬 [1] 杨成 [1] 郭飞 [1] 费建东 [1]
期刊: 《临床肿瘤学杂志》2020年25卷6期 510-515页 ISTICPKUCA
分类号: R735.3
栏目名称: 论著
发布时间: 2020-07-10
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