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微小RNA⁃374a⁃5p靶向调控SRCIN1及对骨肉瘤细胞迁移、侵袭的影响

Targeted regulation of SRCIN1 by microRNA?374a?5p and its effect on migration and invasion of osteosarcoma cells

摘要:

目的 探讨微小RNA?374a?5p(miR?374a?5p)对SRC激酶信号抑制剂1(SRCIN1)的靶向调控作用及对骨肉瘤(OS)细胞迁移、侵袭和Wnt/β?连环蛋白(β?catenin)信号通路的影响.方法 采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测人正常成骨细胞hFOB 1.19及OS细胞(HOS、Saos?2、MG?63和U2OS)的miR?374a?5p水平.脂质体法向U2OS细胞转染miR?374a?5p抑制物(Inhibitor组)和无关对照序列(NC组),并设未转染细胞为对照组,qPCR、MTT比色法、划痕实验和Transwell小室实验检测miR?374a?5p水平、细胞增殖活力、划痕愈合率和穿膜细胞数,qPCR和Western blotting检测SRCIN1、基质金属蛋白酶9(MMP?9)、Wnt1和β?catenin水平.通过生物信息学和双荧光素酶报告实验鉴定miR?374a?5p的靶基因.结果 OS细胞的miR?374a?5p水平均高于hFOB 1.19细胞(P<0.05).Inhibitor组转染24、48 h后的增殖活力均低于其余两组(P<0.05).In?hibitor组的miR?374a?5p水平、划痕愈合率和穿膜细胞数分别为0.327±0.062、(30.893±4.287)%和(140.390±13.598)个,均低于对照组的1.021±0.116、(77.339±5.130)%和(363.922±24.411)个及NC组的1.028±0.142、(75.019±3.670)%和(351.381±19.872)个(P<0.05).与其余两组相比,Inhibitor组的SRCIN1水平升高,而MMP?9、Wnt1和β?catenin水平降低(P<0.05).在线TargetScan预测显示,miR?374a?5p能够与SRCIN1的3'端非翻译区结合,miR?374a?5p模拟物和野生型SR?CIN1质粒共转染细胞的相对荧光强度较其他转染组合降低(P<0.05).结论 异常高水平的miR?374a?5p在OS中发挥致癌作用,miR?374a?5p可能通过靶向SRCIN1激活Wnt/β?catenin通路,进而促进OS细胞的迁移和侵袭,miR?374a?5p/SRCIN1/Wnt/β?catenin轴有望阐明OS的发病机制,为其抗肿瘤治疗提供新候选靶点.

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