• 医学文献
  • 知识库
  • 评价分析
  • 中外期刊
  • 学位
  • 会议
  • 专利
  • 成果
  • 标准
  • 法规
  • 临床诊疗知识库
  • 中医药知识库
  • 机构
  • 作者
论文 期刊
高级检索

检索历史 清除

野生型和A294G突变型血管紧张素转换酶2基因真核表达质粒构建与鉴定

Construction of eukaryotic expression system of wild type and A294G mutant human angiotensinconverting enzyme 2

摘要:

目的 构建人野生型和突变型( A294G)血管紧张素转换酶2(angiotensin converting enzyme 2,ACE2)基因真核表达载体.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增人ACE2基因,与pcDNA3.1真核表达载体连接,构建pcDNA3.1-hACE2重组质粒,通过酶切和测序进行鉴定;以此野生型ACE2真核表达载体为模板,在pyrobest DNA高保真聚合酶的作用下利用体外定点突变法构建ACE2基因突变型重组质粒,用DpnI限制性内切酶处理聚合酶链反应产物,直接转化DH5α感受态细胞,挑取克隆并提取相应质粒,测序加以验证.结果 测序结果证实,野生型和突变型ACE2基因分别插入到pcDNA3.1+中,野生型ACE2基因序列与NCBI网站人ACE2基因全长编码序列(NCBI参考序列:NM_21804.2)相应片段一致,突变型(A294G) ACE2基因除第294位碱基A被G替代以外,其余序列与野生型一致.结论 成功构建了人野生型和突变型ACE2的真核表达质粒,为下一步研究突变型ACE2的生物学功能以及ACE2在疾病发病机制中的作用奠定了基础.

更多
  • 浏览:66
  • 下载:1

加载中!

相似文献

  • 中文期刊
  • 外文期刊
  • 学位论文
  • 会议论文

加载中!

加载中!

加载中!

加载中!

特别提示:本网站仅提供医学学术资源服务,不销售任何药品和器械,有关药品和器械的销售信息,请查阅其他网站。

充值 订阅 收藏 移动端 使用
帮助