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人血管紧张素Ⅱ2型受体基因慢病毒表达载体的构建

Construction of a lentiviral vector expressing human angiotensin Ⅱ type 2 receptor gene

摘要:

目的 构建携带人血管紧张素Ⅱ2型受体(angiotensinⅡtype 2 receptor,AGTR2)基因的慢病毒表达载体.方法 运用基因重组技术,将A GTR2基因克隆至慢病毒载体pLVX-IRES-ZsGreen1中,获得慢病毒表达载体pLVX-A GTR2-IRES-ZsGreen1,XhoI、BamHI双酶切反应及测序分析加以鉴定.在Lipofectamine 2000的介导下将慢病毒表达载体质粒和包装质粒(pHelper1.0、pHelper2.0)共转染人胚肾细胞系(293T),包装慢病毒载体并测定滴度.反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测AGTR2基因在感染病毒的293T细胞中的表达水平.结果 所获AGTR2基因测序证明与GenBank中序列一致;成功构建慢病毒表达载体pLVX-A GTR2-IRES-ZsGreen1并获得相应的慢病毒.收集、浓缩病毒后测定其滴度为1.2×108 TU/mL.构建的携带A GTR2基因的慢病毒表达载体可有效转染293T细胞,RT-PCR结果表明AGTR2基因呈高表达.结论 成功构建AGTR2慢病毒表达载体,为进一步研究其功能建立了实验基础.

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