换一批地塞米松刺激HepG2细胞内源性NTCP表达及在抗HBV药物筛选中的应用
The endogenous NTCP up-regulated by dexamethasone in HepG2 cells which could use for screening anti-HBV compounds
摘要目的 观察地塞米松处理人肝癌细胞HepG2对细胞内源性NTCP mRNA的表达影响,以及刺激后该体系在抗HBV药物筛选中的应用.方法 采用不同浓度地塞米松刺激HepG2细胞,处理后不同时间提取HepG2细胞中总RNA,实时荧光定量PCR检测NTCP mRNA表达量,确定刺激NTCP mRNA表达最佳浓度及时间.采用最佳浓度和时间刺激HepG2细胞,洗去培养基中残留地塞米松,实时荧光定量PCR检测NTCP mRNA表达变化.用HepG2.2.15细胞培养上清浓缩HBV感染地塞米松刺激后的HepG2细胞,ELISA检测细胞培养上清中HBsAg.最后,采用阳性药物验证该体系的有效性、可行性.结果 0.5μm地塞米松刺激HepG2细胞24h时NTCP mRNA表达量最高.撤去地塞米松后96h内,HepG2细胞中内源性NTCP mRNA的表达有一定程度的下降并维持在一定水平.HBV感染地塞米松刺激后的HepG2细胞后,在培养上清中能够检测到乙肝表面抗原.在该体系中,阿德福韦酯抗HBV活性的EC5o为0.26μm,环孢菌素A的EC50为0.19μm.结论 地塞米松能够上调HepG2细胞内源性NTCP mRNA的表达,能够更有效地介导HBV感染,且可以应用于抗HBV药物筛选.
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DOI
10.3969/j.issn.1002-1310.2017.02.002
发布时间
2018-10-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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