修饰猪IGF-1基因壳聚糖纳米颗粒对小鼠生长及免疫的促进效应
Improvement of Growth and Immunity of Mice by Truncated Porcine IGF-1 Gene Encapsulated in Chitosan Nanoparticles
摘要目的研究比较修饰后IGF-1基因对小鼠免疫机能及生长的影响,探索研制调控动物免疫和生长发育的新型安全高效的分子制剂.方法通过重叠PCR扩增技术克隆得到新型短链IGF-1基因,将其分别构建到原核表达载体pGEX-4T-1及真核表达载体VR1020中,得到重组质粒pGG,pGF,VRG和VRF,分别进行体外实验检测器表达活性;然后用壳聚糖和mPEG-PEI修饰得壳聚糖通过离子交联包裹重组质粒,将包裹后形成的纳米颗粒,按0.1mg质粒/只的剂量接种3周龄昆明小鼠.在免疫前及免疫后每隔一周采血,检测小鼠体重变化,血常规检测免疫细胞数量的变化,流式细胞分型技术检测CD4 +/CD8+标记的T细胞,并且通过MTT实验检测上清对L-02细胞的增殖作用.结果发现免疫后14 ~42 d之间,与对照组相比实验组VRI、VRG小鼠外周血中淋巴细胞、CD4+T细胞量明显升高(P<0.05);并且免疫后14 ~56 d之间,与对照组相比,实验组VRI、VRG对小鼠生长的促进作用也非常显著(P<0.05);另外mPEG-PEI-CS和CS包裹VRI、VRG接种的实验组小鼠血清对L-02细胞具有明显的增殖作用.结论 我们的研究首次证明在小鼠免疫后14 ~42 d中,VRG/F与对照组相比,对L-02细胞具有明显的增殖作用(P<0.05).这些结果说明了短链的IGF-1基因能够促进接种后小鼠的生长发育,提高其免疫功能,为进一步研究控制动物传染疾病安全高效的生物制剂奠定了基础.
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