靶向XT-1基因shRNA真核表达质粒载体的构建及筛选
Establish and selection of plasmid expressive vector coding shRNA targeting XT-1
目的 构建靶向木糖转移酶-1(XT-1)的短发卡状小干扰 RNA(shRNA)质粒表达载体;为寻找脊髓损伤治疗的新靶点提供工具.方法 设计4个小分子短发卡状RNA(siRNA)序列,体外合成DNA模板引物,与Pgenesil-1质粒构建成编码shRNAR 的表达载体,进行酶切和测序,再转染体外培养的星形胶质细胞,筛选靶序列.结果 构建的质粒表达载体完全符合设计要求,转染成功的细胞在荧光显微镜下显示绿色荧光,G418可以筛选出阳性克隆.结论 成功构建了编码 XT-1-shRNA的质粒表达载体;该载体为寻找脊髓损伤治疗的新靶点奠定了基础.
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