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人GL50转基因细胞的构建及其生物学功能研究

摘要:

目的 构建稳定表达人GL50基因的小鼠成纤维母细胞L929细胞株,探讨GL50 信号通路对T细胞的共刺激效应.方法 Trizol一步法抽提人扁桃体细胞RNA,RT-PCR法扩增出GL50基因,双酶切装入逆转录病毒载体pEGZ-Term,与辅助病毒载体脂质体法共转染包装细胞293T,用其培养上清感染L929细胞72 h,经Zeocin 筛选出稳定表达GL50分子的L929细胞株;采用3H-TdR掺入实验观察GL50信号对T 细胞体外培养的共刺激作用.结果 成功构建含GL50基因的重组逆转录病毒载体,并获得含有GL50基因的重组病毒,筛选获得能稳定高表达人GL50分子的L929转基因细胞;该转基因细胞对体外培养的T细胞具有促增殖和活化作用;同时,GL50/ICOS信号与CD28/B7 信号具有协同作用.结论 GL50/ICOS信号在机体免疫应答过程中起重要作用;GL50转基因细胞的成功构建为进一步研究GL50分子功能奠定了良好基础.

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